5. Ο φορέας κλωνοποίησης: 9. Δίνεται η μία από τις δύο αλυσίδες ενός τμήματος DNA που πρόκειται να κλωνοποιηθεί με PCR:\[3΄CTAATCTTGTCGGGTGGTCCCAT…..TATTGCAAAACTATGGCAGTTGCG 5΄ \]
Το κατάλληλο ζευγάρι πρωταρχικών τμημάτων που πρέπει να τοποθετηθεί στο δοκιμαστικό σωλήνα προκειμένου να γίνει η κλωνοποίηση, είναι:
14. Δύο διαφορετικά στελέχη βακτηρίων Χ και Υ επωάστηκαν με τέσσερα αντιβιοτικά Π, Κ, Ρ και Σ. Το ποσοστό του αριθμού των βακτηρίων που επέζησαν μετά από 3 ώρες απεικονίζονται στα παρακάτω γραφήματα. Ποιο από τα παρακάτω συμπεράσματα μπορεί να εξαχθεί από αυτά τα αποτελέσματα;
18. Πλασμίδιο που θα χρησιμοποιηθεί ως φορέας κλωνοποίησης διαθέτει γονίδιο ανθεκτικότητας στην πουρομυκίνη, γονίδιο ανθεκτικότητας στην τετρακυκλίνη και γονίδιο ανθεκτικότητας στην στρεπτομυκίνη. Υπάρχουν διαθέσιμες 2 περιοριστικές ενδονουκλεάσες: η ΕcoRI της οποίας η αλληλουχία αναγνώρισης εντοπίζεται στο γονίδιο ανθεκτικότητας στην τετρακυκλίνη και η HindIII της οποίας η αλληλουχία αναγνώρισης εντοπίζεται σε δύο ξεχωριστά γονίδια του πλασμιδίου που κωδικοποιούν τη σύνθεση πρωτεϊνών που επιτρέπουν την επιβίωση σε υψηλές θερμοκρασίες. Το βακτήριο περιέχει στο κύριο μόριο DNA γονίδιο ανθεκτικότητας στην στρεπτομυκίνη.Ι. Ποιο από τα παρακάτω θα χρησιμοποιήσουμε για την κλωνοποίηση;
ΙΙ. Τα μετασχηματισμένα βακτήρια θα μπορούσαν να απομονωθούν από τα μη μετασχηματισμένα με ταυτόχρονη χρήση: 19. Για τις περιοριστικές ενδονουκλεάσες ισχύει ότι: 22. Τα διαφοροποιημένα κύτταρα διατηρούν: 24. Για να γίνει κλωνοποίηση ενός γονιδίου χρησιμοποιήθηκαν: περιοριστική ενδονουκλεάση Α για τον τεμαχισμό του DNA εκατέρωθεν του γονιδίου, περιοριστική ενδονουκλεάση Β για τον τεμαχισμό του πλασμιδιακού DNA σε μία θέση, DNA δεσμάση και άλλα αντιδραστήρια που ευνοούν το σχηματισμό ανασυνδυασμένων πλασμιδίων. Τελικά η διαδικασία δεν στέφθηκε με επιτυχία διότι: 26. Το πλασμίδιο σε ένα πείραμα ανασυνδυασμένου DNA: 34. Έστω ένα πλασμίδιο το οποίο εκτός από γονίδιο ανθεκτικότητας στην αμπικιλίνη, διαθέτει και ένα δεύτερο το οποίο προσδίδει ανθεκτικότητα στην τετρακυκλίνη. Εντός του γονιδίου της τετρακυκλίνης βρίσκεται η αλληλουχία που αναγνωρίζει η EcoRI την οποία χρησιμοποιούμε για τη δημιουργία ενός ανασυνδυασμένου πλασμιδίου. Τα μετασχηματισμένα βακτήρια με το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο: